S17-1 λpir Chemically Competent Cell

基因型：

RP4-2(Km::Tn7,Tc::Mu-1), pro-82, LAMpir, recA1, endA1,thiE1, hsdR17, creC510

簡要說明：

S17-1λpir菌株的染色體中整合了RP4-2質粒，該質?？梢詳y帶染色體的部分DNA在接合菌株之間轉移。S17- 1λpir菌株缺失核酸內切酶 (endA1)，提高了質粒DNA的產量和質量；同時為重組酶缺陷型 (recA1)，減少插入片段的同源重組概率，保證了插入DNA 的穩定性。Tn7賦予該菌株弱的 lian霉素抗性。 S17-1λpir感受態細胞經特殊工藝制作，pUC19質粒檢測轉化效率>1×108 cfu/μg DN

操作說明：

1. S17-1λpir感受態細胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，待菌塊融化，加入目的DNA（質?；蜻B接產物）并用手bo打EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。 

2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動會降低轉化效率。 

3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌培養基 (LB)，混勻后37℃，200 rpm復蘇60分鐘。 

4. 5000 rpm離心1分鐘收集菌體，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的LB培養基上。 

5. 將平板倒置放于37℃培養箱過夜培養（12-15 h）。

注意事項：

1. 感受態細胞最好在冰中緩慢融化。插入冰中8分鐘內加入目標DNA，不可在冰中放置時間過長，長時間存放會降低轉化效率。 

2. 轉化高濃度的質?；蚋咝实倪B接產物可相應減少最終用于涂板的菌量。